ELISAS
son las siglas en inglés de ensayos de inmunoabsorción ligados a enzimas, son un tipo de inmunoensayo comúnmente usado para cuantificar los niveles de un objetivo especifico dentro de una muestra. Las muestras usadas rutinariamente en las ELISAs incluyen serumen, plasma, sobrenadante de cultivos celulares, lisados celulares, saliva, lisados de tejidos y orina.
Tipos de ELISAs
Usualmente las ELISAs se corren en microplacas de 96 pozos cubiertas con un anticuerpo de captura especifico para el analito requerido. Después de la incubación con muestras experimentales, estándars o controles, el analito objetivo es capturado por el anticuerpo. Se usa un anticuerpo de detección conjunta que se une a un epitope diferente en el analito objetivo para completar el sándwich. Posteriormente se agrega una solución de sustrato para producir una señal proporcional a la cantidad de analito ligado.
Existen 4 principales tipos de ELISAs:
Directas
Con este tipo de ELISAs la muestra es inmovilizada directamente en la placa para que posteriormente un anticuerpo de detección se una a la proteína a analizar. Posteriormente se agrega un sustrato lo que produce una señal proporcional a la cantidad de analito en la muestra. Ya que solo se usa un anticuerpo en la ELISA directa, esta es menos especifica que la ELISA sándwich.
Indirectas
Este tipo de ELISA es similar a la directa en cuento el antígeno es inmovilizado en la placa, pero se diferencia en que la ELISA indirecta incluye un paso de amplificación de detección adicional. Inicialmente un anticuerpo no conjugado de detección primario es agregado y este se une al antígeno específico. Posteriormente un segundo anticuerpo ahora conjugado es dirigido en especie huésped del anticuerpo primario. El sustrato produce una señal proporcional a la cantidad de antígeno ligado al pozo.
ELISA Sandwich
Este es el tipo más común de ELISA. Aquí se usan dos anticuerpos específicos para que el antígeno quede rodeado por los dos anticuerpos. El anticuerpo capturado se recubre en una microplaca para posteriormente agregar la muestra y la proteína de interés se une y se inmoviliza en la placa. Posteriormente un anticuerpo de detección conjugado se agrega y se une a un epítopo adicional de la proteína objetivo. Finalmente se agrega el sustrato que produce una señal que es proporcional a la cantidad de analito presente en la muestra. Este tipo de ELISAs son muy específicas ya que se requieren dos anticuerpos para unir a la proteína de interés.
Competitivas
Este tipo de ELISAs son usadas generalmente para moléculas pequeñas, cuando la proteína de interés es demasiado pequeña para rodearla por dos anticuerpos. Esta ELISA es similar a las ELISAs Sándwich ya que un anticuerpo de captura es recubierto en una microplaca y en vez de usar un anticuerpo de detección conjugado, se utiliza un antígeno conjugado para completar la unión con el antígeno presente en la muestra. Entre mas antígeno se encuentre presente en la muestra, menos antígeno conjugado se unirá para la captura del anticuerpo. Finalmente se agrega el sustrato y la señal que se produce será inversamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.
